杭州浩克生物
阿利新蓝-茜素红胎鼠染色
2102实验原理 该染色项目是对骨和软骨进行染色以观察脊椎动物骨骼在生理和病理状态下的改变，阿利新蓝是一种含铜离子的苯二甲蓝染料...
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【产品信息】
| 产品名称 | 产品货号 | 规格 | 价格 |
| IF双染+TUNEL（三染） | HKF2040 | 张 | 300元 |
石蜡切片免疫荧光实验步骤
1、 石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲苯Ⅰ12min-二甲苯Ⅱ12min-无水乙醇Ⅰ6min -95%酒精6min-85%酒精
6min蒸馏水洗。
2、 抗原修复：组织切片置于盛满柠檬酸抗原修复液（PH6.0）的修复盒中于微波炉内进行抗原修复，中火8min
停火8min中低火7min，此过程中应防止缓冲液过度蒸发，切勿干片。自然冷却后将玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。
3、 阻断内源性过氧化物酶：切片加上3%的双氧水，室温孵育25min，将玻片置PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。
4、 血清封闭:在组化圈内滴加3%BSA 均匀覆盖组织，室温封闭30min。
5、 加一抗：切片稍甩干后用组化笔在组织周围画圈（防止抗体流走），在圈内滴加按一定比例稀的抗体覆盖组织。切片平放于湿盒内4°C孵育过夜。
6、 加二抗：玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加与一抗相应种属的二抗覆盖组织，避光室温孵育50min。
7、 信号放大:将玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min 。滴加相对应颜色Flare信号放大试剂，3-5min.将玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min 。双标或者多标的实验从这一步结束后重复步骤2-7，标记第二个，最后在进入步骤2。
8、 修复：组织切片置于盛满EDTA修复液（PH8.0）的修复盒中于微波炉内进行抗原修复，中火8min停火8min
中低火7min，此过程中应防止缓冲液过度蒸发，切勿干片。自然冷却后将玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。
9、 加试剂tunel
工作液：按片子数量和组织大小取tunel试剂盒内适量试剂TdT酶和反应液试剂1:50混合，加到圈内覆盖组织，切片平放于湿盒内，37℃恒温箱孵育1.5小时，湿盒内加少量水保持湿度。
10、DAPI复染细胞核：玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加
DAPI染液，避光室温孵育10min。
11、封片：玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。切片稍甩干后用抗荧光淬灭封片剂封片。
